Trò chơi có sự trở lại của Dante và Nero như những nhân vật có thể điều khiển, cùng với một nhân vật mới, tên là V[5]. Lối chơi tương tự như các phần trước trong series Devil May Cry, tập trung vào "hành động phong cách" nhịp độ nhanh; Người chơi chiến đấu chống lại đám quỷ bằng cách tấn công nhiều kiểu và vũ khí khác nhau. Họ nhận được đánh giá về phong cách chiến đấu dựa trên một số yếu tố, chẳng hạn như di chuyển đa dạng, độ dài của một combo và các đòn tấn công né tránh. Âm nhạc của trò chơi thay đổi dựa trên hiệu suất của người chơi trong chiến đấu[6]. Mỗi khi người chơi tương tác với thợ máy Nico hoặc tìm thấy một bức tượng, họ có thể mua các kĩ năng mới cho mỗi nhân vật. Trong khi có ba nhân vật có thể chơi được, trò chơi buộc người chơi chỉ được sử dụng một nhân vật cho mỗi nhiệm vụ. Giống như các trò chơi trước, tựa game này có chế độ Cung điện đẫm máu, nơi người chơi có thể đối mặt với nhiều loại quỷ trong một khu vực duy nhất.[7]

Nhân vật đầu tiên là Nero, người đã được giới thiệu trong Devil May Cry 4. Anh sử dụng thanh kiếm Red Queen của mình để chiến đấu cận chiến, và khẩu súng lục ổ quay hai nòng Blue Rose. Tuy nhiên, anh không còn có cánh tay quỷ của mình như phần trước nữa mà có một loại cánh tay robot mới được gọi là Devil Breakers. Chúng có nhiều chức năng như bắt kẻ thù từ xa hoặc dừng thời gian để đóng băng kẻ thù tại chỗ. Nero cũng có thể tìm thấy Devil Breakers trong các màn chơi. Devil Breakers rất mạnh nhưng mỏng manh, và có thể bị phá hủy nếu sử dụng không đúng cách[8]. Cuối câu chuyện, Nero thức tỉnh Devil Trigger để mở rộng kỹ năng chiến đấu của anh.

Dante chơi giống như phần Devil May Cry 4 khi anh ta có thể thay đổi giữa bốn phong cách để tạo ra các kỹ thuật mới hoặc ngăn chặn các cuộc tấn công của kẻ thù. Cùng với thanh kiếm đặc trưng của mình "Rebellion" và "Devil Sword Sparda" của Quỷ, Dante sử dụng hai Devil Arms mới, một cặp vũ khí giống như cưa sắt kết hợp thành một chiếc mô tô có tên là "Cavaliere", và một bộ găng tay và ủng bốc lửa được gọi là "Balrog". Dante cũng sử dụng "King Cerberus" một phiên bản mạnh hơn của côn nhị khúc Cerberus được giới thiệu trong Devil May Cry 3. Anh cũng đội "Dr. Faust", một chiếc mũ yêu cầu các quả cầu đỏ (tiền tệ trong game) để tấn công; nó là một vũ khí rủi ro/phần thưởng tùy thuộc vào hành động của người chơi. Dante có thể sử dụng cả "Kalina Ann" từ Devil May Cry 3 và "Kalina Ann 2" cải tiến mới để thay thế cho súng, cũng như cả hai loại cùng một lúc[9]. Bên cạnh Devil Trigger giúp tăng cường khả năng và phục hồi sức khỏe của Dante, nhân vật này còn sở hữu một hình thức mạnh mẽ hơn có tên "Sin Devil Trigger" tạo ra các phương án tấn công mới.[10]

Nhân vật thứ ba có thể chơi được, V, người cầm một cuốn sách và một cây gậy bạc, sử dụng ba con quỷ dựa trên những kẻ thù từ trò chơi đầu tiên để chiến đấu. Chúng bao gồm Griffon, một con đại bàng sử dụng các đòn tấn công tầm xa dựa trên tia sét, Shadow, một con báo biến thành lưỡi kiếm, gai và cổng ra khỏi cơ thể và Nightmare, một con golem lớn và mạnh mẽ. V khi thức tỉnh sức mạnh sẽ giống như Devil Trigger, tóc chuyển sang màu trắng, để triệu hồi được Nightmare, sử dụng kết hợp các cuộc đòn cận chiến và chùm tia laze nổ. Khi máu của kẻ địch chuyển sang màu tím nhạt, V sử dụng cây gậy của mình để giáng cho kẻ địch một đòn cuối cùng.[11]

Trở lại với tư cách là một nhân vật có thể chơi được trong Phiên bản Đặc biệt của trò chơi, Vergil vẫn giữ lối chơi của mình từ khi xuất hiện trong Phiên bản Đặc biệt của trò chơi thứ ba, chẳng hạn như hệ thống đo sự tập trung và vũ khí. Tuy nhiên, Force Edge từ các trò chơi Special Edition trước đây được thay thế bằng một vũ khí mà Vergil thường sử dụng như một loại đạn triệu hồi được gọi là Mirage Edge. Anh có một khả năng mới, cho phép anh biến thành V và triệu hồi tạm thời ba trong số những con quỷ được triệu hồi của mình. Thay vì biến thành dạng Devil Trigger thông thường, Vergil ngay lập tức biến thành bản nâng cấp Sin Devil Trigger của mình.[12]